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人脐带间充质干细胞对大鼠肺成纤维细胞分泌 Smad2 蛋白、 结缔组织生长因子的影响
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R563.1

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    目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对转化生长因子 -β(TGF-β)诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化 的过程及结局的影响。方法 从 10 只健康雌性无特定病原体级(SPF 级)大鼠中提取肺成纤维细胞,用 5 ng/mL TGF-β 处理大鼠原代肺成 纤维细胞的同时,给予不同浓度的 hUC-MSCs 对其共培养,其中 A 组(模型组,加入 40 μL TGF-β)、B 组(5×105 hUC-MSCs 治疗组, 加入 40 μL TGF-β 和 1 mL 5×105 个 hUC-MSCs)、C 组(2×106 hUC-MSCs 治疗组,加入 40 μL TGF-β 和 1 mL 2×106 个 hUC-MSCs)、 D 组 [ 正常组,加入磷酸盐缓冲液(PBS)40 μL],采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞内胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)、α- 平滑肌肌 动蛋白(a-SMA)蛋白表达量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞内结缔组织生长因子(CTGF), Smad2 mRNA 的相对表达量。用 5 ng/mL TGF-β 处理大鼠原代肺成纤维细胞 48 h 后,将其诱导转化为肌成纤维细胞,再和不同浓度的 hUC-MSCs 共培养 24 h,其中 A 组(模型组,加入 40 μL TGF-β)、B 组(5×105 hUC-MSCs 治疗组,加入 1 mL 5×105 个 hUC-MSCs)、C 组(2×106 hUC-MSCs 治疗组,加入 1 mL 2×106 个 hUC-MSCs)、D 组(正常组,不用 40 μL TGF-β 诱导,加入 PBS 40 μL),采用蛋白 免疫印迹法检测各组肌成纤维细胞内 Collagen Ⅰ、a-SMA 蛋白表达量;采用 RT-PCR 检测各组肌成纤维细胞 CTGF、Smad2 mRNA 的相对 表达量。结果 在 TGF-β 诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中,A、B、C、D 组大鼠 Collagen Ⅰ和 a-SMA 的蛋白表达量 均呈现降低趋势(均P<0.05);A、B、C、D 组大鼠 CTGF 和 Smad2 mRNA 的相对表达量均呈现逐渐降低趋势(均P<0.05);大鼠原代 肺成纤维细胞诱导转化为肌成纤维细胞后与不同浓度的 hUC-MSCs 共培养中,A、B、C、D 组小鼠 Collagen Ⅰ蛋白相对表达量和 a-SMA 蛋白相对表达量均呈现降低趋势(均P<0.05),但 A 组和 B 组小鼠 Collagen Ⅰ蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05); A、B、C、D 组大鼠 CTGF 和 Smad2 mRNA 的相对表达量均呈现逐渐降低趋势(均P<0.05),但 B 组和 C 组大鼠 Smad2 mRNA 相对 表达量比较,差异无统计学意义(均P<0.05)。结论 hUC-MSCs 可减少 TGF-β 诱导大鼠肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中表达 Collagen、a-SMA 蛋白及 CTGF、Smad2 mRNA,降低肌成纤维细胞表达 Collagen Ⅰ、a-SMA 蛋白及 CTGF、Smad2 mRNA,且高浓度的 hUC-MSCs 效果最显著。

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